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LonEZTM長片段高保真聚合酶
| For PCR | Enzyme: 5u/μl | Cat.: E3055 |
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LonEZTM長片段高保真聚合酶是南京德泰生物新推出的專為長片段PCR設計的高保真聚合酶。該酶是將單鏈DNA結合蛋白和聚合酶活性片段巧妙地融合在一起，通過重組表達獲得?？奢p松實現對35kb目標片段的精準擴增。LonEZ 不僅有很好的長片段擴增能力，還有大于Pfu的高保真性，是基因組長片段PCR及相關實驗的推薦用酶。
活性
以倉鼠卵巢細胞DNA作為模板/引物，在72℃，在30分鐘攝入10nmol dNTP的活性定義為1個活性單位（U）。
產品優勢
- 長片段擴增：以λDNA為模板，輕松實現35kb基因擴增
- 高保真：通過擴增LacZ基因，藍白斑驗證，保真度為Pfu 1.6倍
- 速度快：5kb目的片段擴增，延伸只需25秒
應用
| 常規PCR |
| 長片段PCR |
| cDNA克隆 |
制品內容
| LonEZTM高保真聚合酶 |
| 10×buffer(Mg2+) |
| 5×buffer(Mg2+) |
| 5×df buffer |
| dNTP mixture 10mM each |
| ddH2O PCR grade |
模板加入量說明
| 人類基因組DNA | 0.1~1μg |
| 大腸桿菌基因組DNA | 10ng~100ng |
| λDNA | 0.5~10ng |
| 質粒DNA | 0.1-10ng |
PCR反應體系
| 試劑 | 體積 | 最終濃度 |
| 10×Buffer(Mg2+) | 5μl | 1× |
| dNTP 10mM each | 4μl | 0.8mM each |
| primer 1 | 1μl | 0.5uM |
| primer 2 | 1μl | 0.5uM |
| Template | 0.1ng-0.5ug | |
| LonEZTM(5U/ul) | 1μl | 0.1U/ul |
| ddH2O PCR grade | Up to 50μl |
注：冰上配置PCR反應體系， DNA聚合酶最后加入到PCR體系中
PCR反應條件
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 30s | 25~30 |
| 退火 | 60℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 10min | |
| 終延伸 | 72℃ | 15min | 1 |
案例介紹
以λDNA為模板，PCR擴增1.2kb-30kb目標片段，有很好的擴增效果
M: λHand III marker????1: 5U的普通Taq酶
2,3,4: 1U,2U,5U的LonEZ????5: 5U的KOD
6,7,8: 1U,2U,3U的LonEZ
2,3,4: 1U,2U,5U的LonEZ????5: 5U的KOD
6,7,8: 1U,2U,3U的LonEZ
模板：人類基因組
目的片段：15kb
1：普通Taq酶
2：LA-PCR Kit（Brand T）
3：LonEZ
DNA Marker：10k to 5k
目的片段：15kb
1：普通Taq酶
2：LA-PCR Kit（Brand T）
3：LonEZ
DNA Marker：10k to 5k
模板：λDNA
目的片段：35kb
1,2：LonEZ
DNA Marker：10k to 0.5k
目的片段：35kb
1,2：LonEZ
DNA Marker：10k to 0.5k
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