Fortebio Octet 實驗FAQ

常用術語解釋

• BLI：生物膜干涉技術
• K_a/K_on：結合常數，單位M^-IS^-I，代表了單位時間內產物生成速率；
• K_d/K_off：解離常數，單位S^-1，單位時間內產物降解成反應物的百分比；
• K_D：親和力常數，單位M，代表了親和作用的強弱；

如何根據K_D值判斷親和力的強弱？

不同反應的“強”“弱”的標準：

• 對于小分子而言（<2KD）：親和力在10^-4-10^-7M，如果KD<100nm（10^-7M），那么這種小分子的結合能力就比較強。
• 對于蛋白而言（如抗原抗體反應）：親和力在10^-8-10^-11M，如果KD>100nm（10^-7M），那么這種小分子的結合能力就比較弱。

動力學和親和力有什么差別？

動力學是通過實時的結合解離曲線計算得到解離常數和結合常數來更細致的描述相互作用。一般只能通過實時監測的技術獲得, 比如 BLI。親和力是描述反應強弱, 基于終點技術的很多方法可以獲得, 比如 ELISA。動力學包含了親和力, 但是親和力不包含動力學。

動力學測試中對樣品的濃度要求是什么？

如果需要獲得 KD 值，必須要知道分析物的濃度。KD 值越大，需要的分析物的測試濃度越大。

BLI 可以測試的生物分子的范圍。

小到150 Da的化合物，大到病毒，以及多肽，蛋白質，DNA/RNA，多糖，多聚物，脂質體，納米顆粒等均在
BLI的可測試范圍。

BLI 方法和傳統的免疫共沉淀，酵母雙雜交方法相比，優勢在哪里？

• 精細的定量化分析，并獲得動力學參數以獲得更多的生物學信息；
• 快速，只需要10 – 20分鐘就對相互作用進行判定；
• 非標記，非變性檢測，更能真實的反應情況

固化蛋白一定要純化嗎？

如果是 SA，SAX，SSA，AR2G，APS 傳感器，固化蛋白一定要純化。如果是基于capture類傳感器，固化蛋白不一定需要純化。但是固化純化的物質可以減輕雜質帶來的影響。

BLI 信號和什么有關？

信號和結合上去的分子的大小和密度有關。對不同物質來說，分子越大，信號越高。對同一種物質來說，結合越多，信號越高，結合量和信號呈正比。

BLI 可以測試的生物分子的范圍。

小到150 Da的化合物，大到病毒，以及多肽，蛋白質，DNA/RNA，多糖，多聚物，脂質體，納米顆粒等均在BLI的可測試范圍。

生物素化需要注意一些什么？

生物素試劑與蛋白的摩爾比在 1:1 – 3:1 之間。目前使用最多的是氨基偶聯的生物素化試劑，所以待生物素化的物質溶液中除了需要生物素化的物質外，不得含有其他帶有氨基的保護劑以及緩沖液 (特別是 Tris 緩沖液)。生物素化完成后需要脫鹽除去未反應的生物素化試劑。